IL5RA

研究背景

IL-5是细胞生长、分化、生存和激活的主要刺激因素。IL5RA,Interleukin-5 receptor subunit alpha,白细胞介素-5的受体α亚基。与 IL5RA 相关的疾病包括 T2-低哮喘和高嗜酸性粒细胞综合征。

难点

该蛋白在蛋白表达阶段极易出现包涵体,蛋白常以不可溶形式出现。
IL5RA和多肽的共晶尺寸太小(<10μM) ,很难优化出尺寸较大的单晶(>50μM)。我们在做了三个月的多种方式方法的尝试之后,依然得不到可以用来做同步辐射的晶体。

分析

包涵体常见的形成原因:
蛋白表达量高,合成速度快
半胱氨酸和脯氨酸的含量
重组蛋白产生的环境
蛋白表达系统内缺少翻译后修饰所需酶类
晶体长不大的原因:蛋白很容易形成晶核。

解决方案

我们在得到IL5RA包涵体之后,进行包涵体纯化和蛋白复性,最终得到纯度大于90%的IL5RA 可融蛋白,将IL5RA 和多肽孵育,通过分子筛的方法纯化IL5RA-AF17121多肽复合物。
尝试多种结晶方案方式都得不到合适尺寸的晶体之后,我们将10μM大小的晶体铺到铜网上 ,用cryo-FIB切出200nm厚度的薄片,然后采用microED的方式收集衍射数据。解析了分辨率为3Å的结构,可以清楚的看到AF17121多肽的电子密度图。
图片6

MicroED解析信号蛋白结构

cGAMP-STING
分辨率:2.8 Å
项目周期:8周(E.coli)
晶体SEM显微片
晶体SEM显微片
 
共晶三维结构图和cGAMP作用位点氨基酸
共晶三维结构图和cGAMP作用位点氨基酸