IL5RA-AF17121多肽复合物
IL5RA-AF17121多肽复合物共晶尺寸太小，无法满足同步辐射所需晶体尺寸要求。最终使用MicroED技术成功解析出分辨率为3Å的结构。
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背景
IL-5是Th2细胞分泌的细胞因子，参与调控嗜酸性粒细胞的功能，与T2-低哮喘和高嗜酸性粒细胞综合征有关。IL-5与IL-5受体结合可激活IL-5发挥作用，因此干扰IL-5受体的激活成为大家研究的方向之一。
AF17121是IL-5的抑制性多肽，在2019年被报道与IL-5受体的α亚基（IL5RA）结合，从而抑制IL-5与IL-5受体的结合。
青云瑞晶利用MicroED三维电子衍射技术成功解析了IL5RA-AF17121多肽复合物结构。
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实验结果
1、蛋白表达
IL5RA蛋白表达易出现包涵体。在得到包涵体后，对其进行纯化和复性，最终获得纯度大于90%的IL5RA可溶蛋白。将IL5RA 和多肽AF17121孵育，通过分子筛的方法纯化IL5RA-AF17121多肽复合物。
图一 分子筛和SDS-PAGE结果
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2、晶体生长和衍射数据收集
尝试多种结晶方案均无法获得合适尺寸的可用于X射线衍射的晶体。
我们将10μm大小的晶体铺到铜网上，用Cryo-FIB切出200nm厚度的薄片，用MicroED收集衍射数据。
图2 Cryo-FIB和MicroED衍射图
A 10μM大小的晶体；B 晶体铺到铜网并用Cryo-FIB切成200nm薄片；C MicroED收集衍射数据
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3、结构解析
根据收集到的衍射数据结合软件解析IL5RA-AF17121多肽复合物的结构，分辨率为3Å。
图三 IL5RA-AF17121复合物结构
