重组蛋白是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。重组蛋白包括各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、免疫检查点、激素、酶、病毒抗原、抗体片段、Prodots等，可用于蛋白结构研究、新药发现、生物药生产、免疫检测试剂开发、抗体制备、体外酶活测定等商业领域以及ELISA、免疫实验、细胞实验等科学研究。
青云瑞晶拥有先进成熟的蛋白表达技术与蛋白纯化体系，可针对客户不同需求完成多种类蛋白的生产，为您提供高纯度、高质量、具有卓越生物活性的蛋白产品。
服务范围
可溶蛋白
在细胞质、细胞周质中，以小分子状态溶于水或其他溶剂的蛋白。
青云瑞晶生物团队拥有成熟丰富的可溶蛋白表达纯化经验，为您提供定制化的一站式蛋白表达纯化服务。
膜蛋白
生物膜所含蛋白，包括糖蛋白，载体蛋白和酶等。是科学研究的热点，也是药物研发的理想靶点。重组膜蛋白过表达的方式可快速足量为您提供研究所需样品。
分泌蛋白
外源基因在细胞内表达，再将蛋白质分泌到细胞外。包括血液和胞外基质中的细胞因子、补体、降解酶类、肽类激素、免疫球蛋白等。
包涵体
外源基因在原核细胞中表达时，形成的由膜包裹的高密度不溶性蛋白质颗粒。包涵体内的蛋白呈非折叠状态聚集，不具有生物学活性。
服务流程
1. 质粒构建
根据您给定的蛋白对应的基因编码序列，我们将合成适于蛋白表达的基因片段。在基因载体的选择和纯化标签的添加上，我们会广泛地查阅文献记载以及听取您的特殊需求，最终根据技术团队的经验，提出最合适的方案。
目前可用的纯化标签、载体包括但不限于以下
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纯化标签 |
载体 |
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His-GST-precission
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His-CL7-precission
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His-GFP-precission
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pET28a
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pFastbac
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His-GST-TEV
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His-MBP-precission
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GP67-His-sumostar-TEV
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pET22b
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pFastbacDuet
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His-TEV
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His-sumo-precission
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FLAG-avi
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pGEX-6p-1
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pColdTF
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His-precission
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His-TEV-EGFP-precission
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mcherry-TEV
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pETDuet-1
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pVB322
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His-Trx-precission
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His-protein A
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…
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pACYCDuet-1
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...
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His-Dsba-precission
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thrombin-Fc
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pCDFDuet-1
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His-strep tag II -precission
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His-precission-strep-TEV
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pcDNA3.1
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2. 表达系统
原核表达系统
通常使用大肠杆菌，如 BL21, Rosetta，其他可用细菌宿主包括枯草芽孢杆菌，链霉菌。
我们拥有多种表达载体与最佳菌株相容库，不断优化表达条件与复性，力求得到最高产量参数组合
适用于 无糖基化、经过简单修饰的重组蛋白、同位素标记蛋白
优点
•
手段成熟、应用广泛、成本低
• 繁殖快，表达量高、缩短实验时间
• 抗污染能力强
• 表达产物分离纯化相对简单、稳定性好
•
遗传背景清晰
酵母表达系统
分为酿酒酵母表达系统和甲醇营养性酵母表达系统，后者（如毕赤酵母 Pichia）是目前应用最广泛的酵母表达系统。
我们利用特有的载体宿主组合，可大大提高重组蛋白表达质量与数量，缩短实验周期。
适用于 分泌蛋白、经过简单修饰的重组蛋白、同位素标记蛋白等
优点
• 周期短、成本低、效率高
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具备了广泛性的对蛋白的加工、翻译后修饰能力
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可用来表达分泌蛋白
• 无内毒素
昆虫表达系统
又称昆虫杆状病毒系统（baculovirus expression vector system, BEVS)，最接近哺乳动物细胞的表达系统。
我们的多系统、多载体的表达策略可以克服传统表达系统中的各种难点，最大程度提高表达效率和表达质量。
适用于 病毒疫苗、信号分子、细胞因子、激酶等
优点
• 基因容量大，外源基因表达效率高
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糖基化和广泛的翻译后修饰
•
重组病毒易于筛选
• 可折叠部分蛋白
• 无内毒素
哺乳动物细胞表达系统
哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供最接近于天然状态的翻译后修饰、蛋白质折叠和聚合，具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰。
我们拥有独特的哺乳动物细胞表达载体和多种转染方法组合，根据目的蛋白选用定制化方案，优化表达条件，从而大大提升表达量，缩短实验周期。
适用于 疫苗、抗体等
优点
• 较高的表达水平
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准确的蛋白折叠和翻译后修饰
• 可表达分泌蛋白
• 悬浮培养特性允许大规模生产
• 无内毒素
目前可用的表达宿主包括但不限于以下
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原核 |
昆虫细胞 |
酵母 |
哺乳细胞 |
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OrigamiB(DE3)
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Tuner(DE3)
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DH10Bac
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C41(DE3)
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High Five
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X33
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Expi293F
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Rossetta(DE3) plySs
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BL21(DE3)
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T7pLysY
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BL21(DE3) plySs
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Sf9
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T7 express
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HT115(DE3)
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C43(DE3)
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Rossetta(DE3)
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Sf21
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3. 蛋白纯化
了解待纯化样品中目的蛋白及主要杂质的性质，根据蛋白质的来源、性质（分子大小、等电点）和稳定性（蛋白质对温度、极端PH、蛋白酶、氧和金属离子等的耐受性）等信息，设计最适的蛋白质纯化思路。
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高压低温匀浆破碎
收获细胞后，通过液体剪切作用来大规模破碎细胞，收获细胞物质以用于后续纯化
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凝胶过滤层析
又称为排阻层析或分子筛。根据被分离样品中各组分相对分子质量大小的差异进行洗脱分离。操作条件比较温和不需要有机溶剂。
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亲和层析
通过生物分子之间的特异性相互作用实现蛋白分离纯化，亲和吸附剂上的配基有选择地吸附能与其结合的物质。具有高选择性、高纯度、快速等特点，通常在重组蛋白的分离中作为第一步的粗提纯，对大部分杂质蛋白进行去除。
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离子交换层析
不同蛋白具有不同的等电点，当其在不同pH缓冲液条件下时所带的电荷不同，可根据蛋白带电性质选择不同的离子交换柱。过程可逆、操控性强，在精纯步骤中常与其他方法结合使用。
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疏水作用层析
根据生物分子疏水性质实现纯化的一种层析方法，在高离子强度下，增进蛋白质与层析介质间疏水作用力，实现吸附；在降低流动相离子强度时，蛋白质分子与层析介质疏水作用削弱，目的蛋白即可洗脱和收集。
