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结构生物学服务

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IL5RA-AF17121多肽复合物
IL5RA-AF17121多肽复合物共晶尺寸太小,无法满足同步辐射所需晶体尺寸要求。最终使用MicroED技术成功解析出分辨率为3Å的结构。

背景

IL-5是Th2细胞分泌的细胞因子,参与调控嗜酸性粒细胞的功能,与T2-低哮喘和高嗜酸性粒细胞综合征有关。IL-5与IL-5受体结合可激活IL-5发挥作用,因此干扰IL-5受体的激活成为大家研究的方向之一。

AF17121是IL-5的抑制性多肽,在2019年被报道与IL-5受体的α亚基(IL5RA)结合,从而抑制IL-5与IL-5受体的结合。

青云瑞晶利用MicroED三位电子衍射技术成功解析了IL5RA-AF17121多肽复合物结构。

实验结果

蛋白表达

IL5RA蛋白表达易出现包涵体。在得到包涵体后,对其进行纯化和复性,最终获得纯度大于90%的IL5RA可溶蛋白。将IL5RA 和多肽AF17121孵育,通过分子筛的方法纯化IL5RA-AF17121多肽复合物。

图一 分子筛和SDS-PAGE结果

晶体生长和衍射数据收集

尝试多种结晶方案均无法获得合适尺寸的可用于X射线衍射的晶体。
我们将10μM大小的晶体铺到铜网上,用Cryo-FIB切出200nm厚度的薄片,用MicroED收集衍射数据。

图2 Cryo-FIB和MicroED衍射图
A 10μM大小的晶体;B 晶体铺到铜网并用Cryo-FIB切成200nm薄片;C MicroED收集衍射数据

结构解析

根据收集到的衍射数据结合软件解析IL5RA-AF17121多肽复合物的结构,分辨率为3Å。

图三 IL5RA-AF17121复合物结构
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