结构生物学服务

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结构生物学服务

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关于“重组蛋白表达&纯化”

重组蛋白表达&纯化

重组蛋白是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质,可用于蛋白结构研究、新药发现、生物药生产、免疫检测试剂开发、抗体制备、体外酶活测定等商业领域以及ELISA、免疫实验、细胞实验等科学研究。

结构生物学是青云瑞晶的核心业务,培养优质的晶体是获得良好结构数据的基础。我们的技术团队可制备纯度极高的符合结晶条件的重组蛋白产品,并根据您的项目需求设计合适的试验方案,帮助您的项目获得更好的实验数据。

青云瑞晶依据数年的结构生物学项目经验,自建了以靶点蛋白为核心的重组蛋白产品库,围绕创新药物研发所需的激酶、膜蛋白、泛素化酶等,不断拓展我们产品累积。

服务内容

  • 激酶
  • 水解酶
  • 泛素化相关蛋白
  • 膜蛋白
  • 其他......

服务优势

  • 高纯度蛋白

    基于结晶标准的蛋白产品,大于90%纯度,结晶性好。

  • 200+蛋白库

    已成功表达200+种重组蛋白,自建蛋白库,积累了丰富的项目经验。

  • 最快一周交付

    原核表达系统最快1周可交付,真核表达系统最快2周可交付。

  • 定制化服务

    如对蛋白有特殊要求,我们可根据您的需求提供定制化的蛋白表达服务,全力满足您的项目需求。

服务流程

  • 基因合成
  • 载体构建
  • 载体转染
  • 蛋白表达
  • 蛋白纯化

质粒构建

根据您给定的蛋白对应的基因编码序列,我们将合成适于蛋白表达的基因片段。在基因载体的选择和纯化标签的添加上,我们会广泛地查阅 文献记载以及听取您的特殊需求,最终根据技术团队的经验,提出最合适的方案。
目前可用的纯化标签、载体包括但不限于以下:
载体种类(质粒)
pET28a pcDNA3.1
pET22b pFastbac
pGEX-6p-1 pFastbacDuet
pETDuet-1 pColdTF
pACYCDuet-1 pVB322
pCDFDuet-1 ……
纯化标签
His-GST-precission His-strep tag II -precission His-GST-precission GP67-His-sumostar-TEV
His-GST-TEV His-CL7-precission thrombin-Fc FLAG-avi
His-TEV His-MBP-pression His-precission-strep-TEV His-precission-strep-TEV-FLAG
His-precission His-sumo-precission His-GFP-precission mcherry-TEV
His-Trx-precission His-TEV-EGFP GP67-His-precission ......
His-Dsba-precission His-TEV-EGFP-precission GP67-His-sumostar-precission

表达系统

  • 原核表达系统

    通常使用大肠杆菌,如 BL21, Rosetta,其他可用细菌宿主包括枯草芽孢杆菌,链霉菌。

    我们拥有多种表达载体与最佳菌株相容库,不断优化表达条件与复性,力求得到最高产量参数组合。

    适用于:无糖基化、经过简单修饰的重组蛋白、同位素标记蛋白。
    优点:
    手段成熟、应用广泛、成本低
    繁殖快,表达量高、缩短实验时间
    抗污染能力强
    表达产物分离纯化相对简单、稳定性好
    遗传背景清晰
  • 昆虫表达系统

    又称昆虫杆状病毒系统(Baculovirus Expression Vector System, BEVS),最接近哺乳动物细胞的表达系统。

    我们的多系统、多载体的表达策略可以克服传统表达系统中的各种难点,最大程度提高表达效率和表达质量。

    适用于:病毒疫苗、信号分子、细胞因子、激酶等。
    优点:
    基因容量大,外源基因表达效率高
    糖基化和广泛的翻译后修饰
    重组病毒易于筛选
    可折叠部分蛋白
    无内毒素
  • 哺乳动物细胞表达系统

    哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供最接近于天然状态的翻译后修饰、蛋白质折叠和聚合,具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰。

    我们拥有独特的哺乳动物细胞表达载体和多种转染方法组合根据目的蛋白选用定制化方案,优化表达条件,从而大大提升表达量,缩短实验周期。

    适用于:疫苗、抗体等。
    优点:
    较高的表达水平
    准确的蛋白折叠和翻译后修饰
    可表达分泌蛋白
    悬浮培养特性允许大规模生产
    无内毒素
  • 酵母表达系统

    分为酿酒酵母表达系统和甲醇营养性酵母表达系统,后者(如毕赤酵母 Pichia)是目前应用最广泛的酵母表达系统。

    我们利用特有的载体宿主组合,可大大提高重组蛋白表达质量与数量,缩短实验周期。

    适用于:分泌蛋白、经过简单修饰的重组蛋白、同位素标记蛋白等。
    优点:
    周期短、成本低、效率高
    具备了广泛性的对蛋白的加工、翻译后修饰能力
    可用来表达分泌蛋白
    无内毒素
目前可用的表达宿主包括但不限于以下:
原核 昆虫细胞 酵母 哺乳动物细胞
OrigamiB(DE3) Tuner(DE3) DH10Bac C41(DE3) High Five High Five X33 Expi293F
Rosetta(DE3)plySs BL21(DE3) T7plysY BL21(DE3) plySs Sf9 Sf9
T7 express HT115(DE3) C43(DE3) Rosetta(DE3) Sf21 Sf21

蛋白纯化

了解待纯化样品中目的蛋白及主要杂质的性质,根据蛋白质的来源、性质(分子大小、等电点)和稳定性(蛋白质对温度、极端PH、蛋白酶 氧和金属离子等的耐受性)等信息,设计最适的蛋白质纯化思路。
  • 高压低温匀浆破碎

    收获细胞后,通过液体剪切作用来大规模破碎细胞,收获细胞物质以用于后续纯化。

  • 凝胶过滤层析

    又称为排阻层析或分子筛。根据被分离样品中各组分相对分子质量大小的差异进行洗脱分离。操作条件比较温和不需要有机溶剂。

  • 亲和层析

    通过生物分子之间的特异性相互作用实现蛋白分离纯化,亲和吸附剂上的配基有选择地吸附能与其结合的物质。具有高选择性、高纯度、快速等特点,通常在重组蛋白的分离中作为第一步的粗提纯,对大部分杂质蛋白进行去除。

  • 离子交换层析

    不同蛋白具有不同的等电点,当其在不同pH缓冲液条件下时所带的电荷不同,可根据蛋白带电性质选择不同的离子交换柱。过程可逆、操控性强,在精纯步骤中常与其他方法结合使用。

  • 疏水作用层析

    根据生物分子疏水性质实现纯化的一种层析方法,在高离子强度下,增进蛋白质与层析介质间疏水作用力,实现吸附;在降低流动相离子强度时,蛋白质分子与层析介质疏水作用削弱,目的蛋白即可洗脱和收集。

相关案例

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