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关于“分子互作”

分子互作

分子互作包括核酸与核酸互作、核酸与蛋白互作、蛋白与蛋白互作。分子互作实验能够直观解读生物学过程和分子识别过程,阐述分子间作用机制,验证候选药物与靶点分子的结合能力,驱动药物先导物的发现,优化药物的安全性、药效、药物剂型和制造工艺。

青云瑞晶组建专门的分子互作技术团队,拥有丰富的互作类项目设计、实施经验,为您提供核酸与核酸、核酸与蛋白、蛋白与蛋白间等各类从方案流程设计到技术实施的整套互作研究服务。

技术手段

  • 等温滴定量热分析技术(ITC)
  • 表面等离子共振( SPR )
  • 微量热涌动( MST )
  • 差示扫描荧光法( DSF/TSA )
  • 微量差示扫描荧光( NanoDSF )
  • 生物膜干涉技术( BLI )
  • 等温滴定量热分析技术(ITC)
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    实验原理
    在设定的恒定反应温度下,当大分子/配体结合物生成时,能量的释放或吸收会导致样品池温度的变化,而这一变化会被精确地检测并记录。通常,一次完整的ITC实验包括确定反应物浓度,滴定、收集数据,校正原始数据,根据校正后的数据得出热力学参数,分析模型。
    应用范围

    量化结合亲和力

    测定热力学特性和活性浓度

    在小分子药物发现过程中确认预期结合靶标

    验证从苗头化合物到先导化合物演化过程中的IC50值和EC50值

    候选药物的选择与优化

    作用机制表征

    测定结合特异性和化学计量

    酶动力学测定

    技术特点

    被研究体系没有任何限制

    测定热力学特性和活性浓度

    样品用量小、灵敏度精确度高

    实验时间短

  • 表面等离子共振( SPR )
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    实验原理
    表面等离子共振是一种光学现象,它在不需要荧光或同位素标记的天然条件下,通过SPR传感芯片监测各类生物分子之间的相互作用过程,即跟踪监测溶液与芯片表面分子的结合和解离的全过程,并捕捉实验过程中的各种特异性信号,最后由数据分析软件整合成互作动力学参数数据。由于其高度的自动化,高度的灵敏度以及动态监测特性,所以现在被广泛地用于各种生命分子互作机理研究。
    应用范围

    小分子药物与蛋白互作

    新药开发:药物与单层细胞互作

    靶向药物运输研究

    抗原抗体互作、生物药开发

    单链寡核苷酸定量计算

    技术特点

    测试过程免标记

    样品用量少

    高通量测试,最高支持8通道测试

    可实时检测

  • 微量热涌动( MST )
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    实验原理
    微量热涌动是一种表征生物分子特性的光学方法,通过观察粒子在微观温度梯度(通常通过1480nm的红外激光,经分色镜后照射到样品。这一过程中水分子吸收红外光发热而形成温度梯度)的定向运动来分析分子间相互作用以及各种化学剂量学参数。
    应用范围

    蛋白-小分子互作(蛋白酶-抑制剂互作,细胞膜蛋白活性分析)

    蛋白-蛋白互作

    蛋白-核酸互作

    蛋白-肽互作

    肽-肽互作

    核酸适配子-小分子互作

    技术特点

    低样品消耗量

    测量时间短

    可在复杂缓冲液中结合分析

    样品不需要固定、无需纯化

    样品兼容性强量

    研究多组分反应

  • 差示扫描荧光法( DSF/TSA )
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    实验原理
    两种技术都是通过分析测量蛋白质的热稳定性来进行高通量药物及靶点筛选。DSF差示扫描荧光技术利用特殊荧光染料为指示剂,当温度升高时,蛋白质折叠结构变化,染料即可结合并增强荧光。
    应用范围

    高通量药物筛选、靶标发现

    蛋白质稳定剂、抑制剂高通量筛选

    小分子化合物抑制剂机制研究

    蛋白质稳定性

    蛋白作用机制研究

    蛋白质结构研究

    技术特点

    样品损耗少

    温度变化范围广

    通量高

  • 微量差示扫描荧光( NanoDSF )
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    实验原理
    蛋白质中的色氨酸(Tryptophan)和酪氨酸(tyrosine)的荧光可随环境变化,而nano-DSF技术可以准确检测蛋白热变形和化学变形过程中内源荧光的变化,从而追踪其折叠状态并测定蛋白稳定性参数Tm或Cm值。
    应用范围

    验证生物药功能性和长期稳定性

    候选生物类似药鉴定

    膜蛋白去垢剂筛选

    配体结合实验

    蛋白制剂筛选

    酶稳定性高通量筛选

    蛋白品质控制

    技术特点

    验证生物药功能性和长期稳定性

    天然条件下检测

    低样品消耗量

    样品不需要固定

    通量选择自由

  • 生物膜干涉技术( BLI )
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    实验原理
    BLI利用光纤生物传感器来实时检测分子结合与解离时传感器光学层厚度的变化。生物分子A结合到传感器末端会形成一层生物膜,当分子A与待检测分子B结合时会引起传感器末端分子量的改变,从而导致生物膜厚度的改变。光通过传感器的生物膜层后发生透射和反射形成干涉光波,生物膜厚度的变化导致干涉光波发生相对位移。生物分子结合前后的干涉光波被光谱仪检测到,形成干涉光谱,以干涉图谱的实时位移(nm)显示出来。最后根据分子结合前后图谱的变化对待检测分子进行分析。
    应用范围

    观察蛋白复合物的组装过程

    核酸与蛋白的相互作用分析

    疫苗中某种微量蛋白的滴度鉴定以及疫苗开发

    小分子化合物(抗体)的筛选等

    肿瘤中分子标记物的筛选

    检测病毒颗粒与蛋白、蛋白与蛋白的相互作用

    抗体和小分子药物的亲和力和动力学测定

    技术特点

    无需标记

    检测用量少

    高通量检测、实验流程简便快速

    实时数据监测

    应用范围宽

    结果精准

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