在生物医学研究的浩瀚星空中，外泌体作为细胞间通讯的重要信使，正逐渐成为科学家们探索疾病机制、开发新型诊疗手段的新宠。然而，要精准捕捉这些微小囊泡的奥秘，仅凭单一维度的表征手段显然已无法满足需求。我们聚焦于多维度外泌体表征的最新进展，探讨在形态、粒径、标志蛋白及纯度等关键方面，如何综合运用多种先进技术，以实现对外泌体的全面解析。
一、形态表征：透射电子显微镜下的“茶托状”秘密
外泌体的形态是其身份认证的第一步。透射电子显微镜（TEM）以其高分辨率，成为观察外泌体膜泡结构、确认其标志性“茶托状”形态的首选工具。此外，扫描电镜（SEM）、低温电子显微镜（cryo-EM）及原子力显微镜（AFM）等技术也各有千秋，为外泌体形态表征提供了更多选择。这些技术不仅帮助我们直观理解外泌体的外观特征，更为后续的功能研究奠定了坚实基础。
二、粒径分析：纳米流式细胞术引领高精度测量
粒径分布是外泌体表征的另一重要维度。纳米流式细胞术（NanoFCM）以其高灵敏度、高分辨率的特点，成为当前最受关注的外泌体粒径分析方法。相比传统方法，NanoFCM能够检测低至30nm的外泌体，并建立起单颗粒水平的多参数定量分析标准，为外泌体的精确定量提供了有力支持。同时，基于颗粒的布朗运动物理方法和动态光散射（DLS）等技术也作为辅助手段，共同绘制出外泌体的粒径分布图谱。
三、标志蛋白鉴定：免疫印迹与新型检测技术并进
外泌体表面标志蛋白的鉴定是确认其身份的关键。CD9、CD63、CD81等四跨膜蛋白，以及Hsp60、Hsp70等热休克蛋白，常作为外泌体的标志性蛋白进行检测。蛋白免疫印迹（Western blot）作为经典方法，仍占据重要地位。然而，随着技术的进步，如基于抗体的磁珠捕获、质谱分析以及新型荧光检测技术等方法的出现，使标志蛋白的鉴定变得更加高效、准确，为外泌体的功能研究提供了更多线索。
四、纯度表征：多维度评估确保实验严谨性
外泌体的纯度是衡量其研究价值的关键指标。由于杂质的干扰，纯度表征往往是鉴定中容易被忽视的一环。通过颗粒数/总蛋白、总蛋白/总脂质、颗粒数/总核酸等多个维度来评估外泌体纯度，已成为共识。其中，纳米流式细胞术NanoFCM和超高效液相色谱UPLC等技术，在纯度判定中展现出独特优势。此外，脂质定量试剂盒和外泌体RNA质量控制（QC）试剂盒等新型工具的出现，为外泌体纯度的多维度评估提供了更多选择，确保了实验的严谨性和数据的可靠性。